Главная » Моль » Способ получения биологически активного продукта из личинок большой восковой моли – патент РФ 2038086 – Спиридонов Н
способ получения биологически активного продукта из личинок большой восковой моли Изобретение относится к биологии и фармакологии. Цель изобретения - получение из личинок большой восковой моли стандартизованного биологически активного продукта, обладающего биостимулирующим, адаптогенным и кардиозащитным действием на основе малоактивных продуктов пчелиной семьи.

Способ получения биологически активного продукта из личинок большой восковой моли – патент РФ 2038086 – Спиридонов Н

способ получения биологически активного продукта из личинок большой восковой моли

Изобретение относится к биологии и фармакологии. Цель изобретения – получение из личинок большой восковой моли стандартизованного биологически активного продукта, обладающего биостимулирующим, адаптогенным и кардиозащитным действием на основе малоактивных продуктов пчелиной семьи. Для этого экстракцию биологически активного продукта проводят 40%-ным этанолом из личинок моли последнего возраста массой 150 мг и более, выращенных вне улья на темной восковой суши, при 20 – 25°С, в темноте , в течение 20 суток до полной экстракции продукта. 3 ил., 6 табл.

Рисунки к патенту РФ 2038086

Изобретение относится к биологии и фармакологии и может быть использовано для получения биологически активного продукта из личинок большой восковой моли.

Большая восковая моль Galleria mellonella L. (Lepidoptera, Pyralidae, далее восковая моль) является повсеместно распространенным паразитом пчелиной семьи. Восковую моль разводят и используют для различных целей: в качестве лабораторного хозяина при выращивании насекомых энтомофагов, применяемых для биологической защиты растений в сельском хозяйстве; в качестве тест-объекта для оценки активности и качества бактериальных препаратов; а также в качестве объекта биохимических и физиологических исследований в энтомологии.

Для выращивания восковой моли в лабораторных условиях в качестве корма используют пчелиные соты, цветочную пыльцу, пыльцу с добавками пчелиного воска, а также искусственные питательные среды различного состава. Наиболее удобной и широкоиспользуемой при массовом выращивании насекомого является искусственная среда с добавками пчелиного воска и меда, разработанная Марстоном с соавторами и модифицированная Ю.И.Кузнецовой. В лабораторных условиях восковую моль выращивают в чашках Петри, стеклянных банках, снабженных крышками с мелкоячеистой впаянной сеткой. Для массового разведения насекомого используют специальные контейнеры.



Известен способ выделения из восковой моли препарата липаз, являющихся пищеварительными ферментами насекомого, которые обладают антимикробным действием по отношению к Mycobacterium fuberсulosis. Для этого личинок восковой моли, собранных в пчелином улье, растирают и высушивают методом Виллштаттера, затем проводят экстракцию липаз из полученного порошка эмульгирующей смесью, содержащей 50% глицерина и 1,5% карбокселя, затем липазы осаждают ацетоном и подвергают лиофилизации.

Недостатком данного способа является ограниченность спектра биологической активности получаемого препарата.

Известен способ получения из восковой моли экстракта, оказывающего ростстимулирующее влияние на лимфобластоидные клетки линии Raj i в культуре. Согласно способу, личинок восковой моли, собранных в пчелином улье, подвергают экстракции 40%-ным этанолом при 20-25 о С в темноте в течение 20 суток.

Недостатком способа является невозможность получения значительных количеств препарата ввиду экономической нецелесообразности разведения личинок восковой моли в пчелином улье, что приводит к ослаблению и гибели пчелиной семьи. Кроме того, способ не обеспечивает получения воспроизводимого по биологической активности продукта вследствие неконтролируемости условий выращивания личинок и поглощаемого ими корма.

Другие способы получения биологически активных препаратов из личинок восковой моли из литературы не известны.

Цель настоящего изобретения повышение выхода и стабилизации биологической активности продукта, а также обладающего адаптогенным, кардиозащитным действием.



Для этого способ, включающий экстрагирование личинок восковой моли, предусматривает выращивание личинок вне улья, а в качестве корма использование темной восковой суши, содержащей продукты многолетней жизнедеятельности пчелиной семьи.

Изобретение основывается на впервые обнаруженных и изученных биологических свойствах темной восковой суши, которая является продуктом многолетней активности пчелиной семьи. Темная восковая сушь образуется из пчелиных сот после выращивания в последних нескольких поколений расплода пчел в течение 3-4 лет. По химическому составу она существенно отличается от пчелиных сот, светлой восковой сушки и очищенного воска, традиционно используемых для выращивания восковой моли. Темная восковая сушь содержит меньшее по сравнению со светлой сушью количество воска (40-55% вместо 70% при влажности 2,2-3,8% вместо 01,-0,5%). Установлено, что, помимо воска, она содержит продукты жизнедеятельности пчел (остатки маточного молочка, личиночные оболочки, покровы пчелиного расплода, углеводы, пептиды, азотсодержащие вещества, серотонин подобные соединения), а также флавоноиды и ароматические кислоты растительного происхождения. Присутствие этих компонентов делает темную восковую сушь полноценной питательной средой для личинок восковой моли и позволяет обходиться без использования цветочной пыльцы, меда и других дорогостоящих пищевых добавок. Установлено также, что темная восковая сушь, не обладающая сама по себе существенной биологической активностью, подвергается метаболической трансформации личинками восковой моли и превращается в биологически активный продукт, обладающий широким спектром действия.



Продукт, полученный предлагаемым способом, содержит несколько биологически активных компонентов. Его химический состав отличается от состава экстракта, получаемого аналогичным способом из личинок восковой моли, выращенных на искусственном корме, а также от состава экстракта темной восковой суши.

Исследования, проведенные на различных биологических моделях, показали, что экстракт личинок восковой моли, полученный предлагаемым способом, обладает широким спектром биологической активности, адаптогенным, ростстимулирующим и кардиозащитным действием, а также стимулирует окислительный метаболизм сердечной и сосудистой тканей.

Вместе с тем экстракт, получаемый из личинок восковой моли, выращенных на искусственном корме, а также экстракт темной восковой суши не проявляют биологической активности.

В отличие от известного препарата липаз из личинок восковой моли (аналог) продукт, получаемый предлагаемым способом не обладает антимикробным действием по отношению к Mycobacterium tubereulasis и другим микроорганизмам.

Ниже приведен конкретный пример осуществления предлагаемого способа. Биологический материал для разведения восковой моли (кладки яиц, личинки, коконы, бабочки) собирали на пасеках в летний период. Определение насекомого проводили по справочнику болезней и вредителей пчел. В дальнейшем постоянное культивирование восковой моли проводили в лабораторно-производственных условиях.

Для выращивания личинок восковой моли использовали контейнер размером 30х30х40 см, снабженный крышкой и вентиляционной щелью, затянутой мелкоячеистой металлической сеткой с размером отверстий менее 1 мм. В контейнер помещали 500 г темной восковой суши (темно-бурого и черного цвета, непросвечивающей в донышках, содержащей 40-55% воска при влажности 2,2-3,8%) и кладку яиц восковой моли (около 500 яиц). Выращивание личинок проводили при 20-25 о С и относительной влажности 80% в течение 35 суток. Для экстракции биологически активных веществ отбирали личинок, достигших последней стадии развития перед окукливанием, массой 150 мг и более. Отобранных личинок (100 г) помещали в широкогорлый сосуд, удаляли паутину и остатки восковой суши. Затем личинок переносили в экстракционный сосуд объемом 600 мл с притертой стеклянной пробкой и добавляли 450 мл 40%-ного этилового спирта-ректификата. Экстракцию проводили при 20-25 о С в темноте при периодическом перемешивании в течение 21 суток до полной экстракции продукта. Затем экстракт фильтровали через бумажный фильтр. Получили 420 мл экстракта. Полученный продукт представляет собой прозрачную жидкость красновато-желтого цвета, содержащую около 1% сухого вещества и обладающую характерной флуоресценцией (440 нм при длине волны возбуждающего света 350 нм). Экстракт хранили в темноте при 4 о С, при этом биологическая активность сохранялась в течение года.



Исследование химического состава полученного продукта. Химический состав полученного продукта исследовали различными биохимическими методами с использованием тонкослойной хроматографии, газовой хроматографии, диск-электрофореза, аминокислотного и элементного анализа, ЯМР, УФ- и люминесцентной спектроскопии. Фракционирование продукта проводили на колонке с сефадексом LН-20 (фиг.1).

В составе продукта обнаружены следующие компоненты:

белки и пептиды (2% сухого вещества), в том числе кислые пептиды, содержащие связанный ароматический компонент, а также щелочная сериновая протеаза (фракция 1);

свободные аминокислоты (50-60% сухого вещества), (фракции 2-5, табл.1);

низкомолекулярный ростстимулирующий фактор (фракция 3);

низкомолекулярные ароматические соединения (фракция 7);

липиды, в том числе жирные кислоты (табл.2);

Одновременно тем же способом готовили экстракт личинок, выращенных на среде, разработанной Марстоном с соавторами и модифицированной Ю.И.Кузнецовой. Среда содержала следующие компоненты (г/кг): отруби 100, мука пшеничная 110, мука кукурузная 140, дрожжи 130, молоко сухое 130, глицерин 210, мед 100, воск 80. Получили продукт, представляющий собой прозрачную жидкость светло-желтого цвета, содержащую около 1% сухого вещества и не обладающую флуоресценцией. Химический состав экстракта исследовали теми же методами. Фракционирование экстракта проводили на колонке с сефадексом IH-20 (фиг.2).

В экстракте личинок восковой моли, выращенных на искусственном корме, обнаружены:



небольшие количества белка (фракция 1);

свободные аминокислоты глицин, аланин, серин, треонин, глутамат, аспартат, валин, гистидин, пролин и др. (фракции 2-5);

Готовили также экстракт темной восковой суши. Темную восковую сушь (100 г) измельчали, помещали в экстракционный сосуд и добавляли 450 мл 40%-ного этилового спирта-ректификата. Экстракцию проводили в тех же условиях в течение 21 суток, затем экстракт фильтровали через бумажный фильтр. Получили продукт, представляющий собой темно-коричневую прозрачную жидкость, содержащую 2,5% сухого вещества и обладающую характерной флуоресценцией (440-460 нм при длине волны возбуждающего света 350 нм). Химический состав экстракта исследовали теми же методами. Фракционирование экстракта проводили на колонке с сефадексом LH-20 (фиг.3).

В экстрактe темной восковой суши обнаружены:

Из фиг. 1-3 видно, что хроматографические профили элюции экстрактов личинок восковой моли, выращенных на темной восковой суши и искусственной питательной среде, а также экстракта темной восковой суши, были различны. Различия наблюдались как в составе, так и в относительном содержании хроматографических фракций. Результаты проведенных анализов свидетельствуют о различии химического состава исследуемых образцов. Биологически активный продукт из личинок восковой моли, выращенных на темной восковой суши, содержит активные компоненты, отсутствующие в экстракте личинок восковой моли, выращенных на искусственном корме и экстракте темной восковой суши:



кислые пептиды, содержащие связанный ароматический компонент (фракция 1);

низкомолекулярный ростстимулирующий фактор (фракция 3);

низкомолекулярные ароматические соединения (фракция 7).

Определение биологической активности

1. Исследование адаптогенных свойств. Для определения адаптогенных свойств экстрактов использовали тест на предельную продолжительность плавания. Опыты проводили на белых беспородных крысах-самцах массой 180-200 г. Две группы животных получали экстракт личинок восковой моли, выращенных на темной восковой суши и искусственной питательной среде, подкожно в дозе 0,2 мл/200 г массы тела ежедневно в течение 30 дней. Две другие группы животных получали экстракт личинок восковой моли, выращенных на темной восковой суши, перорально в дозе 0,1 мл/200 г массы тела ежедневно в течение того же периода времени. Контрольные животные получали эквивалентное количество 40%-ного этанола. На 1, 5, 10, 15, 20, 25 и 30 сутки определяли продолжительность предельного плавания крыс с грузом 20 г. Полученные результаты представлены в табл.3 и 4.

Из данных таблиц видно, что экстракт личинок восковой моли, выращенных на темной восковой суши, обладает выраженным адаптогенным действием, значительно удлиняя время предельного плавания крыс, как при подкожном, так и при пероральном введении. Экстракт личинок восковой моли, выращенных на искусственной питательной среде, а также экстракт темной восковой суши не проявляли выраженных аптогенных свойств.

2. Влияние на окислительный метаболизм тканей. Исследование биологической активности экстракта проводили на 24 белых беспородных крысах-самцах массой 180-200 г. Две группы животных получали экстракт личинок восковой моли, выращенных на темной восковой суши, перорально в течение 30 дней в дозах 0,01 и 0,1 мл/день/200 г массы тела. Контрольная группа крыс получала эквивалентное количество 40%-ного этанола. Через два часа после последнего введения экстракта определяли основные показатели окислительного обмена тканей животных содержание лактата, пирувата и отношение НАД/НАД Н (коэффициент восстановленности пиридиновых нуклеотидов).



Полученные результаты представлены в табл. 5.

Результаты экспериментов свидетельствуют о том, что введение животным экстракта вызывает значительное повышение содержания пирувата в тканях сердца, аорты и печени при одновременном снижении уровня метаболита в крови. Содержание лактата несколько уменьшалось (сердце, аорта) или оставалось близким к контролю. Отношение НАД/НАД Н изменялось в сторону повышения окисленности-аэробизации.

Полученные результаты указывают на выраженное усиление окислительного обмена и энергетических процессов в сердечной и сосудистой ткани под действием экстракта личинок восковой моли, выращенных на темной восковой суши.

3. Исследование кардиопротекторных свойств. Исследование биологической активности экстракта проводили на 34 лягушках весом 30 г. Две группы животных получали экстракт личинок восковой моли, выращенных на темной восковой суши, перорально в дозе 0,05 мл/30 г массы тела в течение 7 и 14 дней. Контрольные животные получали эквивалентное количество 40%-ного этанола. Через два часа после последнего введения экстракта определяли устойчивость сердечной мышцы лягушек к строфантину по стандартной методике. Полученные результаты представлены в табл.6.

Результаты экспериментов свидетельствуют о том, что экстракт личинок восковой моли, выращенных на темной восковой суши, обладает кардиозащитным действием, повышая устойчивость сердечной мышцы лягушки к токсическому действию строфантина.

Таким образом, приведенные примеры показывают, что предлагаемый способ позволяет получать биологически активный продукт из личинок восковой моли с использованием в качестве исходного субстрата малоактивных продуктов пчелиной семьи. Получаемый продукт обладает широким спектром биостимулирующего действия.



Предлагаемый способ в сравнении с известными имеет следующие преимущества: простота выращивания восковой моли в лабораторно-производственных условиях и ее высокая плодовитость обеспечиввают возможность получения биологически активного продукта в промышленных масштабах; способность восковой моли к круглогодичному размножению обеспечивает возможность получения биологически активного продукта вне зависимости от времени года; использование стандартного питательного сырья для выращивания личинок (темно-бурая и черная непросвечивающая в донышках восковая сушь 3-го сорта) в контролируемых лабораторно-производственных условиях позволяет получать стандартизованный продукт.

Благодаря дешевизне используемого питательного субстрата, относящегося к восковому сырью низшей категории, достигается невысокая стоимость производства продукта (около 25 руб./л).

Сырьевые потребности крупномасштабного производства продукта могут быть удовлетворены существующими объемами производства низкосортного воскового сырья. Для производства продукта не требуется разработки специального оборудования.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПРОДУКТА ИЗ ЛИЧИНОК БОЛЬШОЙ ВОСКОВОЙ МОЛИ путем экстракции личинок моли Galleria mellonella L 40%-ным этиловым спиртом при 20 25 o С в темноте, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и стабилизации биологической активности продукта, обладающего также адаптогенным и кардиозащитным действием, в качестве сырья для получения продукта используют личинки, выращенные вне улья за счет кормления темной восковой сушью при 20 25 o С, при этом целевой продукт содержит свободные аминокислоты 50 60% моносахариды и дисахариды 2 4,7% нуклеотиды и нуклеозиды 1,5% высокомолекулярные соединения 1 2% жирные кислоты 0,1% минеральные вещества 7,1 9%

О admin

x

Check Also

Народное средство от моли: обзор самых эффективных методов и средств

Народное средство эффективного избавления от моли Инсектициды вошли в нашу жизнь сравнительно недавно. Однако наши бабушки как-то справлялись с нашествиями насекомых на их жилище.

Настойка из личинок восковой моли в домашних условиях

Настойка из личинок восковой моли в домашних условиях Дорогой читатель моего блога! Сегодня я Вам расскажу о большой восковой моли. В Древней Греции ее называли «золотой бабочкой». Возможно, многие из Вас не знают, что это такое.

ПЧЕЛОВОД – Научно-исследовательские статьи о действии личинок восковой моли на организм человека

П Ч Е Л О В О Д Литвин А. М. тел. сотовый 063 219 33 15 Статья из журнала «Пчеловодство» № 5 2000 с. 58-59 Новая жизнь старого лекарства. Авторы: А.К. РАЧКОВ, М.Н. КОНДРАШОВА, Н.А. СПИРИДОНОВ.

Форум Пчеловодство в Саратове – Просмотр темы – Как избавиться от восковой моли в ульях?

форум Пчеловодство в Саратове Часовой пояс: UTC + 4 часа Как избавиться от восковой моли в ульях? Зарегистрирован: 13-03, 06:58 Как избавиться от восковой моли в ульях? Этот вопрос волнует не толь­ко Людмилу, Ведь вос-ковые моли приносят пчеловодству огромные убытки.

Пчеловодство как избавиться от моли народными средствами

Пчеловодство как избавиться от моли народными средствами Боремся с восковой молью Издревле восковая моль известна как непревзойденное средство борьбы с различными недугами.

Настойка из восковой моли – панацея XXI века: Интересные новости Newsland – комментарии, дискуссии и обсуждения новости

Настойка из восковой моли - панацея XXI века. Настойка восковой моли — универсальное средство для лечения множества заболеваний. От этих маленьких червячков можно получить максимальную пользу.

Применение пчелиной моли в лечебных целях – Пчёлы, Описание, советы, отзывы, фото и видео

Применение пчелиной моли в лечебных целях Пчёлы - Применение пчелиной моли в лечебных целях Применение пчелиной моли в лечебных целях - Пчёлы Восковая моль является очень полезной, потому что имеет богатый биологический состав, ее ценит народная медицина, использует как лекарственное средство.

КАК СОХРАНИТЬ СУШЬ, СОТЫ ОТ ВОСКОВОЙ МОЛИ И МЫШЕЙ? ДЕЗИНФЕКЦИЯ РАМОК, fallout 4 настройки

КАК СОХРАНИТЬ СУШЬ, СОТЫ ОТ ВОСКОВОЙ МОЛИ И МЫШЕЙ? ДЕЗИНФЕКЦИЯ РАМОК! В видео я делюсь своим опытом, какое количество рамок с сушью я оставляю на хранение в зиму, а также каким образом обрабатываю сушь и соты от восковой моли, мышей и инфекционных заболеваний.

Туберкулез – лечение экстрактом восковой моли (наша брошюра)

Звоните! (с 5 часов до 20 часов по МСК) Тел. 8-800-511-06-80 звонок бесплатный Тел. 8-983-207-49-88 для звонков и для СМС сообщений Главная > Полезная информация > Туберкулез — лечение экстрактом восковой моли (наша брошюра) Туберкулез — лечение экстрактом восковой моли (наша брошюра) Настойка восковой моли: лечение туберкулеза Туберкулез – болезнь, лидирующая по смертности среди инфекционных заболеваний.

Настойка из восковой моли – панацея XXI века: marena99

Настойка из восковой моли - панацея XXI века! Воздействие Экстракты и настойки на основе личинок восковой моли обладают мощным восстановительным действием. Они как нельзя лучше способствуют нормализации работы кровеносной системы.

Airbees – Форум пчеловодов – Просмотр темы – О продукте жизнедеятельности личинок восковой моли

Восковая моль – вред или польза?! О продукте жизнедеятельности личинок восковой моли Зарегистрирован: 09 янв 2006, 11:14 Личинки восковой моли (ЛВМ) использовались знахарями и пасечниками для лечения туберкулеза и бесплодия еще в 17-м столетии.

Экстракт восковой моли: отзывы врачей, применение, инструкция – Видео – «Всё до мелочей&raquo

Экстракт восковой моли: отзывы врачей, применение, инструкция Экстракт личинок восковой моли Этим материалом мы открываем новую ветвь, посвященную борьбе с домашними вредителями.

Применение настойки восковой моли и польза от нее: фото и видеообзор

Применяем настойки из огневки с пользой для вашего здоровья! Настойка на основе восковой моли имеет разнообразный химический состав. В ней содержатся многие ферменты и огромное число витаминов и микроэлементов, которые регулируют жизнедеятельность организма.

Информация о восковой моли, которая откладывает личинки в пчелиные соты

Настойка из личинок восковой моли, показания и противопоказания О пользе меда и других продуктов пчеловодства известно всем, даже герой мультфильма медвежонок Вини Пух весело распевает что даже ложечка меда — это уже хорошо.

Личинки восковой моли – вред или польза

Личинки восковой моли - вред или польза Людям, далеким от пчеловодства, понятие восковая моль ни о чем не говорит. В свою очередь, столь безобидное, на первый взгляд, насекомое, хорошо известно пасечникам как вредитель ульев, поедающий все пчеловодческие продукты.

Личинка восковой моли: что это такое, польза и вред, разведение

Польза и вред личинки восковой моли Самая большая неприятность для пчеловода — появление специфической моли в ульях, особенно ее потомства, потому что личинка восковой моли наносит непоправимый вред всей пасеке.

Экстракт восковой моли: отзывы врачей, применение, инструкция

Экстракт личинок восковой моли Этим материалом мы открываем новую ветвь, посвященную борьбе с домашними вредителями. Речь в этом цикле пойдет о моли, как одном из наиболее вредных видов насекомых, способных нанести урон домашнему хозяйству.

Виды моли

Виды моли Оксидом является вещество, формула которого: 2) 3) 4) Оксидом называется бинарное соединение химического элемента с кислородом, который находится в степени окисления 2-. Среди предложенных соединений оксидом является . Правильный ответ указан под номером 2 Заряд ядра химического элемента +35. Его относительная атомная масса равна: Химическому элементу с зарядом ядра +35 соответствует бром с атомной массой 80. Правильный ответ указан под номером 3. Формулы веществ, каждое из которых состоит из атомов трех химических элементов, указаны в ряду: 2) (adsbygoogle = window.

Эффективные средства от моли в квартире

Средства от моли - обзор лучших химических и народных средств Моль - одна из самых распространенных неприятностей, которые могут поджидать вас в квартире. Маленькие серые мотыльки, как правило, живут в самых укромных местах помещений, на тех полках шкафов, до которых у вас давно не доходили руки.

Купить ловушки для моли в Москве

Ловушки для моли Уничтожитель летающих насекомых ЭкоСнайпер GC2-16D Наличие: Да Гарантия: 12 мес. Производитель: Китай Модель: GC2-16D МУХОЯР Липкие полосы от мух и мошек Наличие: Да Гарантия: 12 мес.

Моли – это

Виды моли Словари и энциклопедии на Академике Мо́ли — собирательное название для относительно мелких насекомых из отряда чешуекрылых (бабочек, Lepidoptera), ведущих преимущественно ночной и сумеречный образ жизни.

Как избавиться от моли: Много дельных советов

Как избавиться от моли: много дельных советов — не лавандой единой Вопрос о том, как избавиться от моли, если она поселилась в квартире, актуален для многих хозяек, ведь это насекомое, вернее, его личинки, способны испортить жизнь любому, приведя его любимые вещи в шкафу и пищевые продукты на кухне в негодное состояние.

Как бороться с разными видами моли: Эффективные препараты и средства

Методы борьбы с молью в саду и дома Моль – весьма неприятное насекомое-вредитель, предпочитающее поселяться внутри дома или в саду. Неприметная с виду бабочка наносит существенный урон садовым культурам, шерстяным вещам и шубам, уложенным в шкафу, продуктам питания.

Средство от моли в квартире – народные средства против моли

Средство от моли в квартире - как найти и уничтожить моль в квартире? Появление моли в доме никак не связано с уровнем чистоты и опрятности жилища. Предотвратить ее размножение частыми уборками вам точно не удастся.